实验三　纤维素分解菌的分离

一、实验目的

（1）掌握纤维素降解菌的分离和筛选的方法。

（2）掌握配制培养基的原则和方法。

二、实验原理

纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是植物细胞壁主要成分，属于多糖类物质，是地球上数量最大的可再生资源。土壤中某些微生物能够产生纤维素酶，把纤维素分解为葡萄糖，后再利用。如能利用微生物将其转化为生物产品或生物能源，既可缓解能源短缺又能解决环境污染。因此分离和筛选高酶活性的菌株是有效利用纤维素物质的关键。

纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分：C1酶（外切酶）、CX酶（内切酶）和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。

刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

三、实验材料

1.培养基

羧甲基纤维素钠培养基（初筛培养基）：CMC-Na 3.0g，（NH4）2SO4 2.0g，K2HPO4 1.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，胰蛋白胨1.0g，琼脂20g。

刚果红培养基（复筛培养基）：CMC-Na 3.0g，（NH4）2SO4 2.0g，K2HPO4 1.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，胰蛋白胨1.0g，琼脂20g，刚果红2g，蒸馏水1000mL PH7.0。

2.土壤样品

校园中落叶覆盖下的腐殖土。

四、实验步骤

1.初筛

称取土壤样品10g，倒入含有90mL水和玻璃珠的三角瓶中振荡5min，使土样充分打散。无菌条件下，将土壤悬液稀释成10-7～10-2系列浓度。取稀释后的土壤悬液1mL涂布到以羧甲基纤维素钠为唯一碳源的平板上，28～30℃温度下，倒置培养一周。多次平板划线分离纯化得到纯菌株。

2.复筛

将初筛得到的菌株点样于刚果红培养基上进行复筛，培养2d。采用十字交叉取平均值法，测量降解圈及菌落直径R1，R2。根据R1/R2的值，筛选出比值最大的几株菌。

五、结果与讨论

（1）试述分离不同纤维素分解菌时分离用培养基的差异。

（2）图示所分离纤维素分解菌个体形态特征。