5.7　红茂草中四种生物碱单体的分离与鉴定

5.7.1　材料与方法

（1）材料

①样品

规范化种植的红茂草，经自然干燥、粉碎。

②仪器与药品

a.仪器　RE52-99型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；UV-9200型紫外可见光分光光度计（北京瑞利仪器分析有限公司）；SGWX-4型显微熔点仪（上海精密科学仪器有限公司）；JM628型便携式数字温度计（天津今明仪器有限公司）；Lambda 35型紫外可见光光度计（Perkin Elmer Precisely产品）；Spectrum one B型傅立叶变换红外光谱仪（Perkin Elmer Precisely产品）；核磁1D NMR和2D NMR Varian INOVA-400MHz核磁共振仪，溶剂为CDCl3或DMSO-d6；高分辨质谱HR-ESI-MS Bruker APEX Ⅱ；341型旋光仪。

b.药品　异紫堇碱标准品（购自ABCR Gmbh & Co.KG im Schlehert公司，批号166401，规格10mg），紫堇碱标准品（购自ABCR Gmbh & Co.KG im Schlehert公司，批号260599，规格10mg）、原阿片碱标准品（购自Shanghai tautd biotech CO.，LTD （China）公司，批号E-0411，规格10mg），白屈菜碱标准品（购自ABCR Gmbh & Co.KG im Schlehert公司，批号060306，规格10mg）、95%乙醇、无水乙醇、冰乙酸、氨水、200～300目层析用Al2O3、薄层色谱硅胶G、氯仿、甲醇、氨水、三乙胺、三重蒸馏水等，其余试剂均为国产或进口分析纯。

（2）方法

准确称取红茂草干草粉末250g，置于3000mL锥形瓶中，加入400mL 95%乙醇，振荡摇匀，封口浸泡2～3d。超声波振荡1h后，减压、浓缩，得浸膏80g。将浸膏纱布包裹，悬于水溶液中，加2%NaOH，调至pH在9～10，用氯仿萃取，萃取液减压浓缩，得提取部分A。水溶液加入稀盐酸，调至pH=6，用氯仿萃取，萃取液减压浓缩，得提取部分B。用层析用Al2O3干法装柱，氯仿-甲醇-三乙胺（8∶1∶0.5）为洗脱剂对A部分提取物进行洗脱，收集不同时间段的馏分，以95%乙醇∶冰乙酸∶水∶氨水（3∶0.1∶0.5∶0.1）展开剂，在硅胶G薄板上点样，紫外灯下观察，合并Rf值相同的馏分，依次浓缩，得化合物Ⅰ（13.17mg）和Ⅱ（2.53mg）。同理，加大洗脱剂中的比例，得化合物Ⅲ（9.07mg）。依上法，用无水乙醇-氯仿-氨水（1∶1∶0.1）为洗脱剂，对B部分提取物进行洗脱，经处理浓缩的化合物Ⅳ（1.04mg）。

5.7.2　结果与分析

化合物Ⅰ（图5-32）：无色棱柱状结晶，mp 185℃，分子式C20H22NO4，相对分子质量341，[ɑ +195.4°（CHCl3），紫外光谱220，267，304nm（ε51286，18621，6607），红外光谱2910（—OCH3），2840（N—CH3），3150（—OH）；1H-NMR（400MHz，CDCl3）δ：6.66（1H，s，H-3），3.00（2H，m，H-4），2.43（2H，m，H-5），2.67（1H，dd，J=16.4，3.6Hz，H-6a），2.82（1H，m，H-7），3.11（1H，dd，J=16.4，3.6Hz，H-7），6.79（1H，d，J=8.0Hz，H-8），6.82（1H，d，J=8.0Hz，H-9），2.49（3H，s，N—CH3），3.67（3H，s，1-OCH3），3.91（3H，s，2-OCH3），3.88（3H，s，10-OCH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3）δ：142.0（C-1），125.8（C-1a），129.9（C-1b），151.2（C-2），111.0（C-3），129.2（C-3a），29.3（C-4），52.7（C-5），62.0（C-6a），35.9（C-7），129.9（C-7a），118.9（C-8），110.8（C-9），149.4（C-10），143.9（C-11），120.1（C-11a），62.8（1-OCH3），55.8（2-OCH3），55.4（11-OCH3），43.9（N—CH3）。以上数据与文献报道一致，经鉴定该化合物为异紫堇碱。

图5-32　化合物Ⅰ

化合物Ⅱ（图5-33）：白色棱柱状结晶，mp 148℃，分子式C22H27NO4，相对分子质量369，[ɑ +216°（CH3OH），紫外光谱282nm（ε5754），红外光谱显示甲氧基、氮甲基、羟基特征吸收；1H-NMR（400MHz，CDCl3）δ：6.95（1H，s，H-3），3.00（2H，m，H-4），2.62（2H，m，H-5），3.69（1H，dd，J=16.4，3.6Hz，H-6a），3.16（1H，m，H-7α），3.11（1H，dd，J=16.4，3.6Hz，H-7β），6.88（1H，d，J=8.0Hz，H-8），6.98（1H，d，J=8.0Hz，H-9），3.15（3H，s，N—CH3），3.64（3H，s，2-OCH3），3.79（3H，s，10-OCH3），3.85（3H，s，11-OCH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3）δ：143.7（C-1），122.9（C-1a），124.7（C-1b），152.4（C-2），111.6（C-3），126.2（C-3a），25.5（C-4），51.2（C-5），62.0（C-6a），31.7（C-7），126.9（C-7a），118.8（C-8），111.4（C-9），144.0（C-10），148.7（C-11），118.9（C-11a），61.6（2-OCH3），55.9（10-OCH3），61.2 （11-OCH3），43.4（N—CH3）。以上数据与文献报道一致，经鉴定该化合物为紫堇碱。

图5-33　化合物Ⅱ

化合物Ⅲ（图5-34）：白色棱柱状结晶，mp 207℃，分子式C20H19NO5，相对分子质量353，[ɑ +284.9°（CH3OH），紫外光谱290nm（ε6320），红外光谱1658（—CO—），717（—O—CH2—O—）；ESI-MS m/z：370[M+H]+；1H-NMR（400MHz，CDCl3）δ：6.93（1H，s，H-4），6.89（1H，d，J=8.4，Hz，H-11），6.77（1H，d，J=8.4Hz，H-12），6.61（1H，s，H-1），5.92（2H，s，—OCH2O—），3.83（3H，s，10-OCH3），3.76（3H，s，9-OCH3），3.60（2H，s，H-8），3.32～3.46（2H，m，H-6），3.45～2.78（2H，m，H-5，1.90（2H，s，H-13），1.86（3H，s，N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3）δ：110.3（C-1），148.0（C-2），146.1（C-3），109.2（C-4），135.7（C-4a），32.2（C-5），57.4（C-6），50.3（C-8），128.4（C-8a），151.5（C-9），147.3（C-10），110.6（C-11），127.6（C-12），129.3（C-12a），46.0（C-13），192.8（C-14），132.6（C-14a），101.2（—OCH2O—），60.7（—OCH3），55.6（—OCH3），41.2（N—CH3）。以上数据与文献报道一致，经鉴定该化合物为原阿片碱。

图5-34　化合物Ⅲ

化合物Ⅳ（图5-35）：淡黄色粉末状结晶，mp 133℃，分子式C20H19NO5，相对分子质量353，[ɑ+119°（CH3CH2OH），红外光谱3620（—OH），1625（—C—O—C—）；1H-NMR（360MHz，CDCl3）δ：6.76（1H，d，J=7.9Hz，H-9），6.73（1H，d，J=7.9Hz，H-10），6.66（1H，s，H-4），6.64（1H，s，H-1），5.99（1H，d，J=1.5Hz，—OCH2O—），5.95（1H，d，J=1.3Hz，—OCH2O—），5.934（1H，d，J=1.5Hz，—OCH2O—），5.927（1H，d，J=1.5Hz，—OCH2O—），4.23（1H，br s，W1/2=7.9Hz，H-11），4.08（1H，d，J=15.7Hz，H-6），3.57（1H，br s，W1/2=6.8Hz，H-14），3.43（1H，d，J=15.7Hz，H-6），3.21（1H，d，J=17.5Hz，H-12），3.08（1H，dd，J=17.5，4.3Hz，H-12），2.98（1H，t，J=2.8Hz，H-13），2.27（3H，s，N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3）δ：107.4（C-1），145.3（C-2），145.6（C-3），111.9（C-4），128.9（C-4a），53.9（C-6），117.1（C-6a），143.1（C-7），143.2（C-8），109.6（C-9），120.4（C-10），131.4（C-10a），72.4（C-11），39.7（C-12），125.8（C-12a），42.1（C-13），62.9（C-14），101.4（7，8-OCH2O—），101.1（2，3-OCH2O—），42.4（N—CH3）。以上数据与文献报道一致，经鉴定该化合物为白屈菜碱。

图5-35　化合物Ⅳ

5.7.3　结论

对红茂草化学成分的研究在已经开展了十多年，由于其在临床应用中有明显的疗效，近年又发现有新的药理活性，因此对红茂草中的化学成分及药效物质又引起了新的关注。在研究红茂草成分过程中，采用柱色谱分离和超导核磁共振等技术共分离鉴定出到4种主要化学成分，分别鉴定为异紫堇碱，紫堇碱，原阿片碱和白屈菜碱。其中异紫堇碱含量最高，原阿片碱次之，白屈菜碱为首次从该属植物中分离得到。